Определение уровня фрагментации ДНК сперматозоидов
Анализ повреждений ДНК сперматозоидов для оценки фертильной функции и выявления причин бесплодия.
Сперматозоиды – это высокоспециализированные клетки, задача которых – доставить отцовский геном в ооцит (женскую половую клетку) и поддерживать успешное развитие эмбриона. В последние годы большое внимание уделяется значимости определения степени фрагментации ДНК сперматозоидов, поскольку нарушение их генетического аппарата приводит к снижению фертильности у мужчин и влияет на вероятность зачатия естественным путем и эффективность использования репродуктивных технологий.
Подготовка к исследованию:
- Полностью исключить из рациона алкоголь в течение 6-7 суток до исследования.
- Рекомендуется исключить любую интоксикацию (табачную, наркотическую, на производстве, лекарственными и токсичными веществами). В случае интоксикации, исследование проводить не ранее, чем через 5-10 суток после нее.
- Полностью исключить (по согласованию с врачом) прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием.
- Накануне сдачи эякулята необходимо исключить тяжелые физические нагрузки, конфликтные ситуации.
- Воздержание семяизвержения в течение 2 суток и не более 7 суток. При повторном исследовании предпочтительно устанавливать одинаковые периоды воздержания для снижения колебаний полученных результатов.
- Полностью исключить воздействие повышенной температуры (посещение бани/сауны, производственная гипертермия, лихорадочные состояния) в течение 7 суток.
- Исключить физиопроцедуры и рентгенологическое обследование в течение 72 часов до исследования.
- После массажа простаты исследование можно проводить не ранее, чем через 3-4 суток.
- После лечения простудных и других острых заболеваний, протекавших с лихорадкой, биоматериал рекомендовано сдавать спустя 7-10 суток.
- После лечения воспалительных заболеваний мочеполовой системы биоматериал рекомендовано сдавать спустя 2 недели.
- Перед получением эякулята следует опорожнить мочевой пузырь.
- Запрещено использовать презерватив, смазочные материалы (в том числе слюну) для сбора эякулята.
- Перед мастурбацией необходимо обмыть половые органы и руки.
- Эякулят должен быть собран полностью.
Референсные значения: < 15%
Повышение значений (положительный результат):
- 15-30% – средняя степень фрагментации ДНК сперматозоидов. Возможность естественного оплодотворения возможна, но снижена.
- > 30% – высокая степень фрагментации ДНК сперматозоидов. Возможность оплодотворения путем использования репродуктивных технологий (например, экстракорпоральное оплодотворение).
Понижение значений (отрицательный результат):
- < 15% – низкая степени фрагментации ДНК сперматозоидов. Означает высокую вероятность наступления беременности естественным путем.
Бесплодие – глобальная проблема XXI века, затрагивающая до 48,5 млн пар во всем мире. Доля мужского фактора при этом составляет от 20 до 70%. Согласно определению Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), бесплодный брак – это ненаступление беременности у женщины при регулярной половой жизни в течение одного года и более при отсутствии использования методов контрацепции.
В последние годы большое внимание уделяется значимости определения степени фрагментации ДНК сперматозоидов. Целостность генома сперматозоида нарушается при различных видах интоксикаций, воздействии профессиональных вредностей, неблагоприятных экологических факторах, неправильном образе жизни, варикоцеле и инфекционно-воспалительных заболеваниях мужских половых органов, курении, употреблении наркотических средств, лихорадке, в пожилом возрасте и др. Чем выше количество поражений ДНК, тем ниже целостность генетического материала и вероятность наступления беременности.
Сперматозоиды, содержащие поврежденную ДНК, могут сохранять способность к оплодотворению. Однако повышенная фрагментация ДНК может быть причиной неудач при выполнении процедур ЭКО и привычных выкидышей при естественном оплодотворении. Кроме того, повреждения ДНК сперматозоидов повышают риск онкогенетических заболеваний и передачи генетических дефектов потомству.
Метод TUNEL представляет собой анализ дисперсии хроматина сперматозоида. Это исследование фрагментации ДНК сперматозоидов. Он основан на том принципе, что сперматозоиды с фрагментированной ДНК не способны производить характерный ореол, который наблюдается, когда эякулят смешивается со специальными ферментами. После окрашивания ядра сперматозоидов с повышенной фрагментацией ДНК производят очень маленькие ореолы дисперсии ДНК или совсем не образуют их, тогда как сперматозоиды с низким уровнем фрагментации ДНК высвобождают свои петли ДНК, формируя большие ореолы.
Таким образом, мужчины с бесплодием имеют более высокий уровень фрагментации ДНК сперматозоидов по сравнению с фертильными мужчинами.
Для чего используется исследование:
- Для оценки фертильности мужчины.
- Для оценки целостности ДНК сперматозоидов, определения степени фрагментации ДНК сперматозоидов.
Когда назначается исследование:
- При обследовании мужчины в случае бесплодного брака (отсутствия наступления беременности в течение 12 месяцев при регулярной (2-3 раза в неделю) половой жизни без применения средств контрацепции).
- При обследовании в рамках привычного невынашивания беременности (подряд три и более самопроизвольных прерывания беременности в срок до 22 недель).
- При неоднократных неудачных попытках экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), при планировании и подготовке к ЭКО.
- При выявлении патологии эмбриона в ходе проведения процедуры ЭКО.